C666-1

C666-1人鼻咽癌细胞株（STR鉴定正确）产品基本信息：

细胞名称：C666-1，人鼻咽癌细胞株

规格：1×106cells/T25或1mL冻存管

细胞货期现货，1周左右

种属来源：人

组织来源：鼻

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:：85% DMEM+15% FBS+PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2，每周2-3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

注意事项：限于科学研究等非医疗目的，不可用于人类或者动物的临床诊断使用

注：该细胞复苏后需稳定48h，贴壁较慢。对营养要求高，请务必保持营养充足;细胞密度90%时传代建议按1：2传代(一个T25传2个6cm)，密度不能太稀。

C666-1人鼻咽癌细胞株（STR鉴定正确）细胞培养操作：

1)复苏细胞：将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL*培养基，培养过夜)。第三天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min(视细胞消化情况而定)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加2-3ml*培养基终止消化。轻轻打匀，将细胞分离成单个后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例。

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。